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发布时间：2025-06-26 浏览次数：
(一)β- 肌动蛋白(β-Actin)
β-Actin 是细胞骨架的重要组成部分，在几乎所有真核细胞中都稳定表达，含量丰富且不易受细胞生理状态、处理条件等因素的显著影响 。它的分子量约为 42kDa，适用于大多数哺乳动物细胞和组织样本的 Western blot 实验。在研究肿瘤细胞增殖、分化，或是药物对细胞的作用机制等实验中，β-Actin 是常用的内参抗体。例如，在探究某种抗癌药物对肿瘤细胞蛋白质表达的影响时，β-Actin 可作为内参来校正上样量，确保实验组和对照组之间的可比性。
(二)甘油醛 - 3 - 磷酸脱氢酶(GAPDH)
GAPDH 参与细胞的糖酵解过程，是细胞能量代谢的关键酶。它在各种细胞和组织中广泛表达，且表达水平相对稳定，不受细胞周期、细胞分化等因素的明显干扰。其分子量约为 36kDa，不仅适用于哺乳动物细胞和组织，在植物、微生物等样本的实验中也常被用作内参。在研究细胞代谢相关的课题，如糖尿病状态下细胞代谢途径的改变时，GAPDH 是理想的内参选择，因为它本身就与代谢过程紧密相关，能更好地反映细胞整体的生理状态。
(三)微管蛋白(Tubulin)
微管蛋白包括 α-Tubulin 和 β-Tubulin，它们是构成细胞微管系统的主要成分，在维持细胞形态、细胞内物质运输等方面发挥重要作用。在细胞中稳定表达，不受细胞生长状态、外部刺激等因素的较大影响。α-Tubulin 和 β-Tubulin 的分子量均约为 55kDa，常用于神经系统相关的研究，以及对细胞骨架变化较为关注的实验。比如在研究神经退行性疾病中神经元蛋白质表达变化时，Tubulin 作为内参，可排除因细胞形态改变、细胞数量差异等因素对实验结果的干扰。
二、内参抗体的选择方法
(一)根据蛋白表达特性选择
样本类型：不同的细胞和组织中，内参蛋白的表达情况可能存在差异。例如，在脂肪组织中，β-Actin 的表达水平可能会因脂肪细胞的特殊代谢状态而有所波动，此时选择 GAPDH 作为内参可能更为合适，因为它在脂肪细胞中的表达相对稳定。对于植物样本，由于其细胞结构和代谢途径与动物细胞不同，β-Actin 和 GAPDH 在植物中的表达模式可能与动物中有所差异，需要根据具体植物种类和实验目的，选择经过验证在该植物中稳定表达的内参，如在拟南芥中，UBQ10(泛素结合酶)常被用作内参。
细胞处理方式：如果实验对细胞进行了特殊处理，如转染、饥饿、缺氧等，某些内参蛋白的表达可能会受到影响。例如，当细胞处于饥饿状态时，细胞的代谢途径会发生改变，GAPDH 作为糖酵解途径的关键酶，其表达量可能会发生变化，此时选择 β-Actin 或 Tubulin 作为内参可能更能准确反映上样量。在细胞转染实验中，如果转染的基因与细胞骨架相关，Tubulin 的表达可能会受到干扰，这时 β-Actin 或 GAPDH 可能是更好的选择。
目的蛋白分子量：为了在 Western blot 结果中清晰区分内参条带和目的蛋白条带，避免条带重叠影响结果分析，应选择分子量与目的蛋白差异较大的内参抗体。若目的蛋白分子量约为 50kDa，就不宜选择 Tubulin(约 55kDa)作为内参，可选择 β-Actin(42kDa)或 GAPDH(36kDa) 。
(二)根据实验条件选择
抗体质量：选择内参抗体时，要确保抗体的特异性和灵敏度。特异性高的抗体只与目标内参蛋白结合，不会与其他蛋白发生非特异性结合，从而保证条带的准确性；灵敏度高的抗体能够检测到低丰度的内参蛋白，确保即使在样本量较少的情况下也能得到清晰的条带。购买抗体时，应选择信誉良好的品牌，查看产品说明书中的验证数据，包括在不同样本类型中的应用、与其他蛋白的交叉反应情况等。同时，可参考其他研究者的实验经验和文献报道，选择经过广泛验证的抗体。
实验仪器和检测方法：不同的 Western blot 检测方法(如化学发光法、荧光法)对抗体的要求不同。在化学发光法中，需要选择与二抗标记物(如 HRP)兼容的内参抗体；在荧光法中，则要根据所使用的荧光染料波长选择合适的内参抗体，确保内参蛋白的荧光信号与目的蛋白的荧光信号不相互干扰。此外，实验仪器的灵敏度和检测范围也会影响内参抗体的选择。如果仪器的灵敏度较低，应选择灵敏度更高的内参抗体，以保证能够检测到内参蛋白的信号。
实验成本和时间：内参抗体的价格和供货周期也是选择时需要考虑的因素。在满足实验要求的前提下，可以选择价格相对较低、供货稳定的抗体，以降低实验成本。同时，如果实验时间紧迫，应选择能够快速供货的抗体品牌，避免因抗体缺货而延误实验进度。